黑色素瘤細(xì)胞株在適宜條件下無(wú)限傳代

　　產(chǎn)品目錄或者細(xì)胞說明書上的推薦的培養(yǎng)基一般是黑色素瘤細(xì)胞株的原始提供者推薦的培養(yǎng)基或者已經(jīng)經(jīng)過驗(yàn)證的對(duì)該黑色素瘤細(xì)胞株zui合適的培養(yǎng)基，細(xì)胞對(duì)未推薦的培養(yǎng)基也許會(huì)適應(yīng)，也有可能不適應(yīng)。對(duì)于更換培養(yǎng)基，應(yīng)謹(jǐn)慎對(duì)待，更換培養(yǎng)基時(shí)，應(yīng)留一瓶細(xì)胞使用推薦的培養(yǎng)基培養(yǎng)，留作種子。黑色素瘤細(xì)胞株更換培養(yǎng)基有兩種方法，zui簡(jiǎn)單的方法是直接更換培養(yǎng)基，強(qiáng)制使細(xì)胞適應(yīng)新的培養(yǎng)基；還有一種更溫和的方法：傳代細(xì)胞的時(shí)候分成細(xì)胞兩瓶，*瓶使用原來(lái)推薦的培養(yǎng)基，第二瓶使用50%原來(lái)推薦的培養(yǎng)基，50%新的培養(yǎng)基，之后仔細(xì)觀察細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)，如果第二瓶細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不好，應(yīng)立即停止更換培養(yǎng)基，如果第二瓶生長(zhǎng)狀態(tài)好，黑色素瘤細(xì)胞株可以繼續(xù)傳代分瓶，一瓶使用50%原來(lái)推薦的培養(yǎng)基，50%新的培養(yǎng)基，另一瓶使用25%原來(lái)推薦的培養(yǎng)基，75%新的培養(yǎng)基，繼續(xù)觀察，如果細(xì)胞狀態(tài)好，可以全部換成新鮮的培養(yǎng)基。

　　黑色素瘤細(xì)胞株的污染鑒定、預(yù)防和處理問題。普通微生物污染：培養(yǎng)基渾濁，高倍鏡觀察有微生物污染；按規(guī)定棄用并全面嚴(yán)格滅菌。支原體污染：顯微鏡無(wú)法觀察，依經(jīng)驗(yàn)表現(xiàn)為細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢，有細(xì)胞漂浮等等，應(yīng)通過PCR 等方法鑒定，如發(fā)現(xiàn)支原體污染，應(yīng)按規(guī)定棄用，實(shí)驗(yàn)室要及時(shí)全面消毒滅菌，防止蔓延。（有些常規(guī)性細(xì)胞學(xué)實(shí)驗(yàn)不受支原體污染影響，可以繼續(xù)使用細(xì)胞傳代，為防污染擴(kuò)大蔓延，可以選擇性的在培養(yǎng)基中加入價(jià)的其它種抗生素，并在隔離實(shí)驗(yàn)室操作和獨(dú)立使用一切用具與培養(yǎng)基等）。

　　胞在培養(yǎng)瓶長(zhǎng)成致密單層后，已基本上飽和，為使細(xì)胞能繼續(xù)生長(zhǎng)，同時(shí)也將細(xì)胞數(shù)量擴(kuò)大，就必須進(jìn)行傳代（再培養(yǎng)）。黑色素瘤細(xì)胞株傳代培養(yǎng)也是一種將細(xì)胞種保存下去的方法。同時(shí)也是利用培養(yǎng)細(xì)胞進(jìn)行各種實(shí)驗(yàn)的必經(jīng)過程。懸浮型細(xì)胞直接分瓶就可以，而貼壁細(xì)胞需經(jīng)消化后才能分瓶。一般使用蛋白水解酶（比如胰蛋白酶）消化貼壁細(xì)胞成單個(gè)細(xì)胞，也可加入乙二胺四乙酸（EDTA）提高消化能力，EDTA 是一種二價(jià)離子的螯合劑，能抑制細(xì)胞膜上的Ca2+和Mg2+。常用的細(xì)胞消化液一般含有0.25%(w/v)的胰酶和0.03% (w/v) EDTA，一般用不含Ca2+和Mg2+的鹽溶液配置，先用胰酶-EDTA 消化液清洗細(xì)胞（5.0 -10.0 ml/75cm），然后棄去消化液，重新加入少量的胰酶-EDTA 消化液(2.0 to 5.0 ml/75 sq. cm flask) ，觀察黑色素瘤細(xì)胞株直到細(xì)胞變圓脫離瓶壁，此過程一般需要5-15分鐘，為了避免細(xì)胞成團(tuán)，消化細(xì)胞的過程中不要拍打細(xì)胞瓶。對(duì)于特別難消化的細(xì)胞，可以加入胰酶EDTA 消化液后把細(xì)胞置于37°C 促進(jìn)消化，細(xì)胞脫離瓶壁后，立刻加入含有血清的*培養(yǎng)基中止消化，血清中某些蛋白質(zhì)能夠抑制胰酶的活性。一般情況下，離心并不需要。如果細(xì)胞需要無(wú)血清或者低血清的培養(yǎng)基，可以以125000g 轉(zhuǎn)速離心5分鐘，然后棄去中止用的培養(yǎng)基，加入適合的新的培養(yǎng)基輕輕混勻細(xì)胞，移入到新的培養(yǎng)瓶。傳代的比例視細(xì)胞類型而定，一般是1:2-1:20，黑色素瘤細(xì)胞株具體比例可參考說明書。胰蛋白酶會(huì)對(duì)某些細(xì)胞的細(xì)胞膜產(chǎn)生損傷，對(duì)于這種類型的細(xì)胞，可用細(xì)胞刮輕輕刮下細(xì)胞，加入適量的培養(yǎng)基，輕輕吹打混勻細(xì)胞，然后進(jìn)行傳代培養(yǎng)。